有多种原因。如果根据经验目的基因的表达确实应该低于内参基因的话,常见的问题是模板异常,如严重的DNA污染等。但也不排除其他原因,如引物特异性等。
你在重新培养起来你的菌种的时候有没有加相应的抗生素?如果没有生存压力(质粒上相应携带的抗生素抵抗基因所对应的抗生素)存在的话,质粒的丢失现象会很严重 ps 补救办法有的呀~你可以再提一下质粒重新转化一下恩~
原核生物同一群体的每个细胞都和外界环境直接接触,它们主要通过转录,以开启或关闭某些基因的表达来适应环境条件(主要是营养水平的变化),故环境因子往往是的诱导物。而大多数真核生物,基因表达最明显的特征时能...
扩增丰度低的基因如果从RNA 入手,应首先考虑RNA的纯度和完整性,如果重复不出来,可能是RNA 在重复使用的过程中降解,建议先跑电泳检测其纯度和完整性,如果确实降解,就应重提RNA。另外,如果你曾经有一次扩出目的产物,可...
既然其他样本有结果,说明引物没有问题。而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题。PCR试剂也OK。一个解释,目的基因在这个样本中表达很低。如果是做定量的话建议用real time。这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到。
在实时荧光定量PCR (qPCR) 中,Cq 值代表着 PCR 反应的阈值。Cq 值越低,说明模板开始翻倍的时间越早,即样本中的目标基因含量越高。因此,Cq 值可以用来估计目标基因表达量的相对水平。在 qPCR 中,表达量通常使用 2^...
质粒转染后pcr检测显示,基因表达量很低是怎么回事 转染(transfection):指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程.常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类.转染目的:研究你的目的片段到细胞内的...
实验组的目的基因和对照组的目的基因比。比如你实验组内参的CT值比对照组小一,那说明你实验组的加样量比对照组多了一倍。在计算目的基因的时候就要把实验组的目的基因的量除以二在和对照组比较。以此类推。
提供一个可能性,但不一定适用你的生物学问题。因为基因之间存在互作关系,可能它的上游基因的甲基化比较高,所以导致它的表达量低
所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。