能的。如果不染菌的话。在培养基中加抗生素是为了增大选择压力,使得含有质粒的菌存活下来,所占的比例增高。忘记加抗生素(没有染菌的情况),可以提取质粒,不过理论上会少一些。(一些特殊的质粒可不敢保证。)PS:我以前...
即长出来的菌不是你想要的菌,不过如果规范无菌操作的话,这种情况一般不会发生。因为做感受态细胞的时候也是不加抗生素的。2.质粒丢失因为没有抗性压力造成菌体在复制过程中质粒丢失。因为质粒对于工程菌来说是一种负担,在...
该情况没加抗生素质粒会丢。底盘菌的感受态(已经转了两个质粒进去了),结果用了没加抗生素的培养基摇菌,即便做好了感受态质粒也丢没了。同时转化三种质粒至大肠杆菌,效率极低,个别组合甚至没有。重复两次,结果类似。实...
因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物,加入抗生素会把细胞杀死。不过青霉素是个例外,因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成,而不是直接杀死细胞,所以它只是抑制增殖,细胞还可以存活,然后表达抗青霉素基因,然后就能进行正...
首先要明白加氨苄等抗生素的目的是筛选,只有能够表达抗性基因的细菌才能生存。其次,做感受态的目的是为了扩大培养细菌,并不是筛选。最后又加抗生素的目的是看带有相应抗性基因的质粒有没有成功转到细菌中。
为什么”?有,不含抗生素。质粒上携带的不含抗生素的抗性基因是会干扰正常的细菌生长的,细菌中含有质粒对生长是有影响的,因为在不含抗生素的条件下的细菌某些抵御外界环境因素会影响的细菌再生的能力。
可以的,取10ul菌液接种到LB培养基中,220rpm,37℃过夜,LB记得加抗生素,否则会质粒丢失,完全不必加琼脂粉。
我们实验室有过类似情况,保存的菌在抗性培养基中生长,但提不出质粒。后来重新转化了一下就好了。可能是抗生素失效后杂菌生长起来了。也可能提取失败,比如丢失、降解等,看到的沉淀是盐。
准确地说,细菌就算软入重组质粒,质粒上的抗性基因也不能马上表达,所以细胞还不具有抗性,细胞比较脆弱,不能在复苏时加抗生素,否则,细菌都死掉了。。。
1.建议重新配置LB培养液2.确保菌种是新鲜的,如果过于老旧,建议重新涂盘(抗生素选择盘),挑克隆。3.最后实在不行,可以适当降低培养液中抗生素的浓度